流感病毒研究中BeaverBeads Protein A/G 抗體純化磁珠的應(yīng)用
中國(guó)科學(xué)院沈陽應(yīng)用生態(tài)研究所徐明愷團(tuán)隊(duì)在eLife上發(fā)表的文章介紹了一個(gè)包含流感病毒保守表位和超抗原的重組蛋白誘導(dǎo)廣譜保護(hù)。
研究背景 每年流感疫情的爆發(fā)給公共安全造成巨大的威脅。一直以來，能夠應(yīng)對(duì)新出現(xiàn)的流感病毒的疫苗都處于短缺狀態(tài)。為解決這一問題，結(jié)合誘導(dǎo)交叉保護(hù)抗體反應(yīng)的保守抗原與激活交叉保護(hù)T細(xì)胞反應(yīng)的表位是可采取的策略之一。
中國(guó)科學(xué)院沈陽應(yīng)用生態(tài)研究所徐明愷團(tuán)隊(duì)在eLife上發(fā)表的文章介紹了一個(gè)包含流感病毒保守表位和超抗原的重組蛋白誘導(dǎo)廣譜保護(hù)。在這次研究中，研究者設(shè)計(jì)構(gòu)建了一種名叫NMHC的重組蛋白，這種蛋白包含了流感病毒的保守性表位和超級(jí)抗原片段。
NMHC重組蛋白由核蛋白NP（一種流感病毒的保守內(nèi)部抗原），基質(zhì)蛋白2外域M2e（一種在甲型流感病株內(nèi)高度保守的多肽），血凝素莖區(qū)HA2上高度保守的α螺旋結(jié)構(gòu)和SEC2（用于強(qiáng)化抗原性的細(xì)菌超抗原葡萄球菌腸毒素C2）組成。研究者用BeaverBeads Protein A/G抗體純化試劑盒，對(duì)血清中抗體進(jìn)行純化，純化后的抗體與NMH形成穩(wěn)定絡(luò)合物的能力，后續(xù)通過pull-down實(shí)驗(yàn)來確認(rèn)：將抗體與NMH孵育，用BeaverBeads Protein A/G磁珠拉下NMH。分離上清，洗脫并中和磁珠上的抗體后，用SDS-PAGE分析結(jié)合與未結(jié)合上的抗體比例。
圖.重組蛋白設(shè)計(jì)、純化、復(fù)性和驗(yàn)證
研究結(jié)果顯示，重組蛋白NMHC促進(jìn)了B細(xì)胞和T細(xì)胞的對(duì)流感病毒感染的免疫反應(yīng)。NMHC的SEC2端促進(jìn)了樹狀細(xì)胞的成熟，成熟的樹狀細(xì)胞將NMH端的抗原呈現(xiàn)給CD4+ T細(xì)胞和CD8+ T細(xì)胞。這一過程促進(jìn)了CD4+ T細(xì)胞和CD8+ T細(xì)胞的活化，增殖和分化。因此，研究者提議將NMHC作為預(yù)防多種流感的通用型疫苗備選。
BeaverBeads Protein A/G 為納米級(jí)磁性微球，適用于血漿、腹水、組織培養(yǎng)上清液等樣品中的抗體純化，也可以用于抗體固定及其它研究，其優(yōu)勢(shì)：
1.具有超大比表面積、超強(qiáng)的抗體結(jié)合力；
2.表面親水化處理，具有較低的非特異性吸附；
3.洗脫條件溫和，一步即可從血清樣品中分離出純度>90%的抗體。
配合磁性分離器，可在10min內(nèi)完成抗體吸附過程，30min內(nèi)完成抗體純化流程，大幅度縮短抗體純化所需的時(shí)間。此外，配合預(yù)制緩沖液，為抗體純化實(shí)驗(yàn)提供了最佳的反應(yīng)條件，提高了抗體純化實(shí)驗(yàn)的穩(wěn)定性。
